脑立体定位注射

 
Chinese, Simplified
感染部位:脑部

1、麻醉-皮下注射麻醉剂Xylazin/Ketamine 混合液(10mg/kg, 100 mg/kg )(Xylazin/Ketamine,Sigma-Aldrich X1251, K2753)。

2、剃除小鼠头部眼睛到耳朵之间的毛发,放到立体定位仪的保暖托盘上。

3、归零牙齿和耳朵的标尺。并在小鼠的眼睛上涂上眼药膏(Oculentumsimplex, Teva Pharmachemie),防止眼睛干掉。

4、将小鼠上门牙固定到固定板的槽内,确保头部保持固定。调节Bregma和Lambma在同一矢状线上和水平面。务必确保小鼠鼻子居中、稳定。

5、用手术刀花开小鼠头部皮肤,用手术刀刮掉表面硬脑膜,如有血迹请用棉签擦干,确保bregma 和lambda位置清晰可见(加示意图)。

6、把bregma 坐标归位0(X,Y,Z=0),确保lambda位置与bregma位于同意水平面上。

7、根据目的脑区设定好坐标。一旦坐标固定,用marker笔在颅骨做出标记,并在10秒内在颅骨钻出一个约0.015mm的孔。钻的过程务必小心,以防损伤脑组织。

8、把带注射AAV吸入针内,根据上一步设好的坐标进针。进针完成后以0.05-0.1 微升/min的速度缓缓注射病毒,通常一只小鼠注射体积在0.05-2微升之间。

9、注射完毕,保持10min,然后慢慢回针。

10、操作过程中如有血流出需要用棉签及时吸干。

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