CCK-8细胞增殖检测试剂盒

产品简介

 

CCK试剂盒是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)(图1-2) ,其颜色的深浅与存活细胞数目成正比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,可以间接反应活细胞的数量。

 

CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

图1. WST-8和WST-8甲攒结构图

图2. CCK-8检测细胞活性原理

 

 

货号

产品名称

产品规格

产品包装

价格

HB-CCK8-1

CCK8细胞增殖试剂盒

100次

1ml

188元

HB-CCK8-2

CCK8细胞增殖试剂盒

500次

5ml

625元

HB-CCK8-3

CCK8细胞增殖试剂盒

1000次

10ml

1125元

HB-CCK8-4

CCK8细胞增殖试剂盒

3000次

30ml

2500元

HB-CCK8-5

CCK8细胞增殖试剂盒

10000次

100ml

6250元

注:4℃干燥避光保存,有效期一年(推荐)。-20℃干燥避光保存,有效期二年。

  

 

 

 

产品优势

 

表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK法

甲臜产物的水溶性

差(需加有机溶剂溶解后再检测)

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

  注:1、酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;

  2、本试剂盒细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

 

 

毒性测试

 

1、在96孔板中配置100 μl的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

2、向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、向每孔加入10 μl CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

注:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

 

 

细胞活性检测

 

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μl/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃, 5% CO2)。

2、向每孔加入10 μl CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

 

5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

 

 

 

注意事项

 

1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

2)有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

3)白细胞可能需要培养较长时间。

4)当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

5)如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

6)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

 

活力计算:

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

 

*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 

 

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