汉恒生物-悬浮细胞专用腺病毒

 产品简介

 

1.悬浮细胞专用

汉恒生物开发的悬浮细胞专用腺病毒针对悬浮细胞的细胞膜特性进行了腺病毒的改造,病毒感染体系也进行了相应的优化,极大改善对悬浮细胞的感染能力。对贴壁细胞的感染能力无影响,可以通用。

2.超强感染效率

  汉恒悬浮细胞专用腺病毒对Jurkat、K562等众多悬浮培养细胞系感染效率接近100%,对血液来源原代细胞,如CD4+ T细胞感染效率可达60%以上。

 

 

腺病毒的细胞感染特性

 

1)腺病毒不插入细胞基因组,不形成稳定转染;

2)腺病毒的瞬时表达能力一般为2-4周,细胞增殖越快,表达时间越短;

3)由于不会随机插入损伤基因组,相比较慢病毒,腺病毒对体外培养的目的细胞毒性较小,因此可以用较高MOI来感染目的细胞。

 

4)高滴度:汉恒生物提供的腺病毒产品滴度较高,由于采用了汉恒特有的体系,用于细胞感染级别的腺病毒一般可以达到1010 PFU/ml滴度。

 

 

 图1.悬浮细胞感染图片

 

腺病毒细胞实验策略

 

由于腺病毒的非稳转性、低离体细胞毒性以及高滴度,应用腺病毒感染细胞的一般策略是:先扩增足量的目的细胞,然后用腺病毒载体感染目的细胞,待目的基因表达后直接进行后续的细胞功能性实验。一般不会用腺病毒先感染细胞后再对细胞进行二次扩增放大化培养。

 

 

悬浮细胞专用腺病毒感染实验相关知识点

 

1)悬浮细胞准备:腺病毒建稳转细胞系前,请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。腺病毒感染的时候细胞汇合率为40%~60%间为宜。

2)感染细胞最佳MOI的测定:MOI(感染复数)是指每个细胞感染的病毒数。

   腺病毒对于不同种类不同来源的细胞,其最适MOI各有差别。对于悬浮细胞,腺病毒MOI一般以30, 100, 300, 1000, 2000的比例递增进行梯度摸索,相比于贴壁细胞,悬浮细胞的腺病毒MOI需求更高,MOI梯度摸索建议用96孔板进行以节省病毒和细胞。

3)MOI对应病毒体积的换算(非常重要!

感染时细胞数(一般以传代计数细胞数×2计算)×MOI=病毒个数;则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度。

比如第一天传代1×104细胞到96孔板一个孔,第二天长到2×104细胞,按照MOI=500计算,需加入病毒总量为2×104×500=1×107个病毒粒子,按照腺病毒1×1010  PFU/ml的滴度,则加入的病毒体积数为(1×107)/(1×1010  PFU/ml)=1×10-3 ml=1 μl。

 

 

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