polybrene助转染试剂

产品信息

      货号

      产品名称

产地

规格

报价(元)

HB-PB-500

Polybrene助转染试剂

hanbio

500 μl

450

HB-PB-1000

Polybrene助转染试剂

hanbio

1 ml

700

产品简介:

 

Polybrene(聚凝胺)是一类高价离子季铵盐多聚物,溶解后带正电,与细胞表面的阴离子结合,能显著提高逆转录病毒对细胞的感染效率。一般能提高感染效率2~10倍。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的哺乳动物细胞转染。。但Polybrene对某些细胞也是存在毒性的,因此,使用之前要先对细胞进行测试。

另外Polybrene也用于蛋白测序,小剂量的Polybrene在自动测序分析中可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

使用方法:

 

1. 慢病毒感染

⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。

⑵ 第二天感染前,从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意:轻轻混匀,不要使用振荡器。

⑶ 吸去细胞原有培养基,将按照MOI稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene(对于293细胞,终浓度6μg/ml)加入细胞中,轻轻摇匀。37℃培养过夜

注:病毒液-培养基- Polybrene混合液,按如下操作制备混合液:①添加完全培养基(60mm培养皿2ml,100mm培养皿3ml),37°C预热;②加入病毒轻轻混匀;③加入Polybrene至终浓度为2μg-12μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时 ,我们建议客户添加Polybrene(终浓度2~12μg/ml,浓度因不同的细胞而异,具体的请参考相关文献)来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是JurkatkasumiNB4H929GBC-SDMCF-7等,建议不要添加Polybrene;大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene,以上仅供参考。

⑷ 感染48小时后,吸除含慢病毒的培养基,换为新鲜的培养基。

⑸ 继续培养24~48小时后,根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。

 

2. 质粒转染

⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。

⑵ 准备DNA-培养基- Polybrene混合液(具体加入方法与慢病毒转染相同)。

⑶ 去除培养基,在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液,在37°C孵育细胞6-20h。

⑷ 去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1X HBSS)轻轻盖住细胞(60mm培养皿3ml,100mm培养皿4ml)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s,使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4min。

⑸ 立即去除DMSO shock solution,用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗,100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。

⑹ 加入完全培养基到细胞中,根据需要进行后续实验。 

注意事项:

 

1.       使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。

2.       整个实验,应规范操作包括反应体系的配制、样本处理及加样。

3.       为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。