无缝克隆试剂盒HB-infusion(TM)

一、产品简介

HB-infusionTM无缝克隆试剂盒是一种新型、快速并且高效的Gibson Assembly DNA定向克隆技术,可以在任意载体的任意位置一次插入多个目的基因片段。HB-infusionTM无缝克隆试剂盒操作极其简单,仅需在载体的克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物的5’端引入与载体克隆位点两端完全一致的15~25 bp同源序列(图1,图3)。将上述线性化的克隆载体和带有同源序列的PCR片段按合适比例混合,并加入HB-infusionTM Master mix,通过反应体系中DNA外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的在50反应20 min即可快速完成定向克隆,阳性率几近100%

1. HB-infusionTM快速克隆试剂盒原理示意图。1. 线性化目的载体(左上);2. PCR获取目的片段。设计的引物5需要和线性化载体末端有15~25 bp的重叠(图中蓝色和黄色片段,细节可参考图3);3. 按照一定比例把二者混合在HB-infusionTM2´预混液内,50°C反应20 min后直接转化E.coli即可。

 

 

 

二、HB-infusionTM试剂盒的优点

1. 相比于传统的同源重组的无缝克隆方法进行,HB-infusionTM试剂盒更高效,操作更简单,只需要一次反应即可完成定向克隆;

2. 对酶切位点无要求,可以把目的片段插入到任意载体的任意位点;

3. 连接片段之间不会引入任何其他序列;

4. 可以同时克隆多个片段。

三、产品包装

 

产品组成

使用次数

体积

2 x HB-infusionTM Master mix

20 tests

200 ml

Positive linearized pUC vector 250 ng

5 tests

25 ml

Positive control insert (500 ng)

5 tests

25 ml

储存条件

-20

Chinese, Simplified
 
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