汉恒高效Annexin V/PI凋亡检测试剂盒

 

汉恒高效Annexin V/PI凋亡检测试剂盒

简介

 

凋亡是细胞死亡的一种基本形式,在胚胎发育,组织分化和一些疾病发生过程中起着重要的调控作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜内侧,一旦发生细胞凋亡,可以从细胞 膜的内侧迅速翻转到细胞膜外侧,使得 PS 暴露在细胞膜表面。

 

在体外可以用 PS 与抗凝血剂 Annexin V 的相互作用检测外翻的 PS。在 Ca2+存在的情况下, Annexin V 与 PS 有很高的亲和力,可以与之迅速结合。PS 外翻发生在细胞核破裂、DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得 Annexin V 与 PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

 

汉恒生物技术研发团队独立开发的高效Annexin V/PI凋亡检测试剂盒,可以有效地进行细胞凋亡检测。

 

 

操作流程

 

共有三种不同的操作步骤:

1)直接在培养基中完成 Annexin V-FITC 与 PS 的结合(快速 Annexin V-FITC 结合检测法),

2)需要 PBS 清洗后在结合缓冲液中完成 Annexin V-FITC 与 PS 的结合(传 统 Annexin V-FITC 结合检测法)

3)用于 Annexin V-FITC 与贴壁细胞结合。

如果可能推荐使用第一种快速检测法。三种方法都需要准备足够的 1×结合缓冲液(快速检测法 0.5 ml/样本,传统检测 法 1.0 ml/样本),将 5×浓缩结合缓冲液按照 1的比例稀释在去离子水中即可。置于冰上。

 

 

注意事项

 

1)为了得到最好的实验结果,请在使用该试剂盒前参考以下的说明。

2)为了防止由于沾在管盖上造成的试剂损失,移除管盖前需要轻轻旋转使沾在管盖上的液体落入管内。

3Propidium iodide 可以通过吞咽或皮肤接触对身体造成伤害,并且可以造成眼睛发炎疼痛。它应该被当作可能的致敏原对待。

4)操作时需要戴手套,穿实验服,戴防护眼镜。

5)使用 Annexin V-FITC 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。固定操作可能会干扰 FITC 信号强度。 标记后固定细胞是一种可能的解决办法,但是需要提供过量的 Ca2+确保 Annexin V 与 PS 相互作用在 固定过程中不会消失。

6Annexin V-FITC 结合后需要尽快进行检测分析,因为凋亡是一个动态持续的过程。FITC 信号小时后也会损失减弱。

7Propidium Iodide 和 Annexin V-FITC 对光敏感,尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可 以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。

8)用 Annexin V-FITC 成功检测早期凋亡依赖以下几个因素,包括细胞类型,膜 PS 表达水平,凋亡过程中外翻 PS 的量,诱导凋亡的方法(或试剂),诱导凋亡的时间以及实验过程中机械损伤的程度。推荐根据每次实验样本类型和操作流程对这些步骤进行优化。

 

 

 

 

 
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