细胞增殖

   

简介

 

       细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础,是细胞最基本的生理活动。方法有流式PI检测、Ki67法等。汉恒生物为您提供全方位的细胞增殖实验服务。

 

Cellcycle 流式细胞检测实验

 

       通常利用通常用PI染细胞核,PI在一定波长的光下发出荧光,其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物,分选细胞。

 

实验步骤:

(1)将细胞以1×106接种于60mm培养板,80%汇合后转染。

(2)24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素(真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选)。

(3)48-72小时后用胰酶消化收集细胞,PBS洗两遍,弃上清,加入1ml 70%预冷乙醇中,吹打均匀,4℃固定12小时以上。

(4)PBS洗涤去乙醇,1000rpm, 5min,洗两遍。

(5)0.5 mlPBS重悬细胞,加入PI和 RNaseA至终浓度50µg/ml,37℃ 温浴30 min。

(6)用流式细胞仪测定周期。

PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。

RNaseA:10mg/ml

 

Ki67免疫荧光实验

 

        增殖细胞核抗原Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质。 Ki-67抗原是目前多种恶性肿瘤尤其是乳腺癌研究中的热门生物指标,可以通过Ki-67抗原的检测,了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。肿瘤增殖Ki67表达范围覆盖除G0 期以外的各增殖周期细胞。研究结果提示PCNA 和Ki67 均可较好地用于检测乳腺癌组织中的增殖细胞,二者基本可以互为代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表达,更具可用性。两者具有一定的互补性。Ki-67在低分化腺癌组织中的表达较在中高分化腺癌组织的表达明显升高,表明Ki67 染色阳性程度与组织学分级的相关性。表明Ki67表达与乳腺癌发生、发展有关,是一个不良预后因素,对乳腺癌的诊断治疗及预后评价有重要的参考价值。

 

实验结果图:

 

 

 

 

 
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