AAV在体自噬流检测

 

 

汉恒生物研发团队推出的RFP-GFP-LC3双标的腺相关病毒(AAV),可在体检测自噬流,准确、清晰、直观!在体研究自噬,请拨打全国免费技术热线:400-092-0065,专业的技术支持为您服务!

 

 

AAV其他相关特色服务

 

1.    腺相关病毒AAV包装服务

2.    在体敲除AAV-SaCas9包装服务 

3.    AAV光遗传技术服务

 

 

自噬简介

 

         细胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又称为Ⅱ型细胞死亡,是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene,Atg) 的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过目前根据发生过程分为三类:Macroautophagy,Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。

     大自噬(Macroautophagy):即我们说的自噬(autophagy);

     微自噬(Microautophagy):是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方式;

     分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA):一些分子伴侣,如hsp70,能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。通常说的自噬泛指Macroautophagy.

 

自噬的过程

 

1):细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构,然后不断扩张,被称为Phagophore。
2):Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,全部揽入,然后“收口”,成为密闭的球状的autophagosome,即“自噬体”。
3):自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。
4):自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的“货物”也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。

 

 

 

 

图1. 自噬的过程图

 


最有效的在体自噬流检测工具:AAV-mRFP-GFP-LC3

 

       汉恒生物技术工程师构建RFP-GFP-LC3双标的腺相关病毒(AAV)载体,包装成双标的腺相关病毒,可在体观察自噬,实时检测自噬流的强弱,更加准确、清晰、直观!弥补了LC3自噬双标腺病毒在体转染的缺陷,并且可根据组织器官的亲和性,选择不同的AAV血清型,是最有效的在体自噬流检测工具!

图2. AAV-mRFP-GFP-LC3指示载体脑组织自噬流

(Cell Death Dis.2013 Nov 14;4:e917)

 

 

AAV载体不同血清型

 

研究发现 AAV 具有多种血清型,各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同,因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。目前汉恒生物在包装腺相关病毒时有12 中不同的 AAV 血清型可供客户选择,建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的 AAV 病毒,见表 1。

 

表1.12种不同血清型AAV对各组织器官细胞的亲和性

血清型

组织亲和性

AAV1

肌肉,心脏,骨骼肌(包括心肌),神经组织

AAV2

中枢神经,肌肉,肝脏,脑组织,眼,

AAV3

肌肉,肝脏,肺,眼

AAV4

中枢神经,肌肉,眼,脑

AAV5

肺,眼,中枢神经,关节滑膜,胰腺

AAV6

肺,心脏

AAV7

肌肉,肝脏

AAV8

肝脏,眼,中枢神经,肌肉

AAV9

心脏,肌肉,肺(肺泡),肝脏,中枢神经

DJ

肝脏,视网膜,肺,肾脏

     DJ/8   

肝脏,眼,中枢神经,肌肉

 Rh10

肺, 心脏,肌肉,中枢神经,肝脏

 

 

 

 

参考文献:

 

1、TRB3 links insulin IGF to tumour promotion by interacting with p62 and impeding autophagic proteasomal degradations;
 (2016年发表于Nature Communications,作者:胡卓伟)

 

 

 
服务分类: