自噬LC3双标慢病毒

 

自噬LC3双标慢病毒产品参数 

 

   

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HB-LP210 0001
Autophagy Indicator

1ml (10^8 TU)

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自噬简介

 

        细胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又称为Ⅱ型细胞死亡,是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene,Atg)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。


       比利时科学家Christian de Duve在上世纪50年代经过电镜察看到自噬体(autophagosome)构造,并且在 1963 年溶酶体国际会议上首先提出了“自噬”这种说法。因而Christian de Duve被公以为自噬研讨的鼻祖。Christian de Duve 也因发现溶酶体,于1974年取得诺贝尔奖。

 

   

目前根据发生过程分为三类:Macroautophagy,Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。

大自噬(Macroautophagy):即我们说的自噬(autophagy);

微自噬(Microautophagy):是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方式;

分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA):一些分子伴侣,如hsp70,能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。通常说的自噬泛指Macroautophagy.

 

自噬的过程

 

1):细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构,然后不断扩张,被称为Phagophore。
2):Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,全部揽入,然后“收口”,成为密闭的球状的autophagosome,即“自噬体”。
3):自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。
4):自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的“货物”也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。

 

 

 

 

自噬的调控

 

一、依赖mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶点)途径的自噬

     1)PI3K-AKT-mTOR信号通路

     2)AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路

二、其它的信号通路

     1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)通过抑制Class Ⅲ PI3K的活性抑制自噬。

     2)beclin1和UVRAG作为正调控子,抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成Class Ⅲ PI3 复合物调控自噬。

     3)GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬;GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。

     4)死亡相关蛋白激酶(death-associated protein linase,DAPK)和DAPK相关蛋白激酶(DAPK-related protein kinase-1,DRP-1)诱导自噬。

     5)PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途径也在自噬错综复杂的调控网格中,但其机制还不甚清楚。

 

 

 

 

自噬与疾病

 

1、自噬与代谢

     自噬能清除不正常构型的蛋白质,并消化受损和多余的细胞器,是真核细胞中广泛存在的降解/再循环系统。在细胞新陈代谢、结构重建、生长发育中起着重要作用。在饥饿和新生儿早期,自噬作用明显加强,自噬体显著增多。

 

2、自噬与肿瘤

     细胞自噬与肿瘤的关系十分复杂,目前尚未完全阐明。一方面,正常细胞自噬增强,可表现出抑制肿瘤发生的功能;与此相反,抑制细胞自噬有潜在的致瘤可能。另一方面,肿瘤细胞也可通过增强细胞自噬来对抗由缺氧、代谢产物、治疗药物诱导的应激反应。

  

 

汉恒自噬产品与服务

 

自噬抑制剂

 

1)3-Methyladenine(3-MA):(Class III PI3K) hVps34 抑制剂
2)Bafilomycin A1:质子泵抑制剂
3)Hydroxychloroquine(羟氯喹)

 

自噬相关抗体

 

1)A14292,Premo自噬TB/ GFP TR-FRET LC3B抗体试剂盒

2)Anti-MAP1A/LC3A/B 自噬微管相关蛋白轻链3抗体

3)Anti-MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3)  自噬微管相关蛋白轻链3抗体

4)兔抗人、大、小APG4B细胞自噬相关抗体\ Anti-APG4B/AUTL1

5)自噬微管相关蛋白轻链3抗体\ Anti-MAP1LC3A

6)Anti-SQSTM1 / p62 antibody

汉恒生物已开发并完善了多套自噬相关的研究体系和工具,并积累了丰富的自噬研究经验

 

 

汉恒独家推出双荧光LC3细胞自噬慢病毒 

 

      

                                                                  双荧光指示体系:汉恒生物科技(上海)有限公司已开发出用于产品。

 

 

   

       mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。

 

      我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。

如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。

红色斑点是自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点是自噬体(RFP+GFP). 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱,实时监测自噬发生过程,准确,清晰,直观!

 

 

参考文献:

 

1、Repair of critical-sized bone defects with anti-miR-31-expressing bone marrow stromal stem cells and poly (glycerol sebacate) scaffolds;
 (2014年发表于European cells & materials,作者:Deng Yuan)
 
2、MicroRNA-22 induces endothelial progenitor cell senescence by targeting AKT3;
 (2014年发表于Cell Physiol Biochem ,作者:Xu Z)
 
3、A lentiviral sponge for miRNA-21 diminishes aerobic glycolysis in bladder cancer T24 cells via the PTEN/PI3K/AKT/mTOR axis;
 (2015年发表于Tumor Biology,作者:Changjun Yin)
 
4、p53/PUMA expression in human pulmonary fibroblasts mediates cell activation and migration in silicosis;
 (2015年发表于Sci Rep,作者:Jie Chao)
 
5、Endocytosis mediated by Caveolin-1 inhibits activity of matrix metalloproteinase-2 in human renal proximal tubular cells under hypoxia;
 (2016年发表于Int J Clin Exp Pathol ,作者: Jun Dou)
 
6、MTSS1 suppresses cell migration and invasion by targeting CTTN in glioblastoma;
 (2015年发表于Journal of Neuro-Oncology,作者:Qigui Qi)
 
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