南方医科大学客户发表CELL,AAV助力肝纤维化研究

  2019年8月29日,南方医科大学丁彦青及周伟杰共同通讯在Cell在线发表题为“LECT2, a Ligand for Tie1, Plays a Crucial Role in Liver Fibrogenesis”的研究论文,揭示了LECT2表达水平与肝纤维化分期有关;提示与临床相关的血清LECT2水平可作为肝纤维化的潜在诊断标志物,而靶向LECT2/Tie1信号通路可能为该肝病的治疗提供新的途径。而在本篇文章中,利用的腺相关病毒(AAV)载体,在活体水平对LECT2基因进行干扰,正是来自于汉恒生物。

  肝纤维化是在数百万肝病患者中非常常见的病症,慢性肝病(CLD)患者最常出现反复肝损伤,肝纤维化等生理变化。肝纤维化会导致肝硬化,这是全球最常见的死亡原因之一。但由于分子发病机制的特征不明确,尚无有效的治疗方法。

  白细胞衍生的趋化因子2(LECT2)是一种16kDa的分泌蛋白,最初被鉴定为中性粒细胞的趋化因子,可刺激软骨细胞和成骨细胞的生长。然而,LECT2在肝纤维化发展中的作用及其潜在机制仍然很不清楚。

 

  在本文章中,研究者首先通过免疫组化检测了正常肝和纤维化肝样品中LECT2的表达,证明了纤维化的肝样品中LECT2表达增加。并通过对临床样本的检测,证明无论引起肝纤维化的病因为何,患者的血清LECT2水平均显著升高,且与血清ALT水平不同的是,即使进入肝硬化晚期,血清的LECT2水平依然可以检测到显著的增加。证明血清LECT2水平可能是肝硬化的一种潜在的非侵入性生物标志。

  接下来,作者在临床肝硬化样本中检测了LECT2与Alb (肝细胞标记物)、CD31(内皮细胞标记物)、a-SMA(活化的肝星状细胞[HSCs]标记物)和CD11b(巨噬细胞标记物)的共定位,证实了LECT2主要由肝实质细胞和内皮细胞分泌。并在CCl4诱导的小鼠肝纤维化动物模型中也证实了这一点。体外实验则证明转化生长因子b1 (TGF-b1)可上调野生型小鼠中分离的原代内皮细胞对LECT2的分泌。

   为了证明LECT2可以促进肝纤维化,作者首先观察了正常小鼠和CCl4诱导的肝纤维化小鼠的肝脏中LECT2的表达水平,发现LECT2在肝纤维化小鼠的门静脉区域和肝损伤边界表达量显著增加,且血清LECT2可升高6-7倍。为了进一步验证,作者通过慢病毒载体在小鼠体内过表达LECT2(LV-LECT2),导致肝纤维化的加重。而在敲除了LECT2的小鼠模型中,CCl4诱导产生的肝纤维化也被显著降低,而LV-LECT2可以重新加重肝纤维化水平。作者在这些实验中注意到了LECT2能诱导纤维化因子a-SMA,TGF-b1, ET1, interleukin (IL)-33, FN1, IL-11, and COL4等的分泌量增加。