AAV肝门静脉注射

Chinese, Simplified
 
感染部位:肝脏

1、麻醉-皮下注射麻醉剂 Xylazin/Ketamine 混合液(10mg/kg, 100 mg/kg )(Xylazin/Ketamine,Sigma-Aldrich X1251, K2753)。

2、在小鼠的眼睛上涂上眼药膏(Oculentum simplex, Teva Pharmachemie),防止眼睛干掉。

3、小鼠仰卧,腹部朝上。将第二肋骨和第四乳头之间的区域脱毛处理。这步操作可以在小鼠清醒状态下提前1天完成。

4、对去毛区域反复消毒。然后用手术刀划开从肋骨到第四乳头区域,长度约3cm。注意不要伤及乳腺、肠道、肝脏等其他组织。

5、用消毒棉签小心把大小肠等内脏拉出来,并用纱布轻轻遮盖,防止触碰。直到看清肝门静脉。

6、病毒事先吸入32g针头注射器,在肝脏下方距离约1cm的位置,以小于5度的夹角沿着肝门静脉缓缓插入肝门静脉3-5 mm(肝门静脉示意图,如果难以看清,可以借助解剖镜辨识)。

7、然后缓缓注射病毒。注射完成停留3-5s再拨出针头,并用棉签轻轻按压片刻。然后用止血棉覆盖肝门静脉,用棉签轻轻按压5min协助止血。这一步务必确保止血完成,否则继续按压,直至止血完成。

8、然后去除止血棉(如果止血棉粘连组织严重可以用灭菌PBS湿润)。

9、然后把拉出的脏器轻轻归位。4-0线缝合伤口,10-15针。

10、伤口部位注射100 μl bupivacaine (5 mg/ml)止疼;并用26G胰岛素针皮下注射500 微升无菌PBS进行水合。整个手术耗时30min左右。

11、实验完毕需要保持小鼠身体足够温暖(比如37度加热灯、温箱等),以利于苏醒。

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