双萤光素酶检测试剂盒

双萤光素酶检测试剂盒

 

 

萤光素酶(Luciferase :是自然界中能够产生生物发光的酶的统称,其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,荧光素酶可以催化特定的荧光素底物转变成氧萤光素,同时发出强烈的光。

 萤火虫萤光素酶(firefly LuciferaseF-Luc), 61kDa,可催化D-荧光素发出萤光

 海肾萤光素酶(Ranilla luciferaseR-Luc), 36kDa,可催化腔肠素发出萤光

 


 

特点:

1.底物存在时,催化底物发出萤光

2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比

 

应用

 

miRNA和靶基因结合双萤光素酶验证方案

 

miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子,通过靶向结合目的基因的结合位点(通常位于基因的3端非编码区——3UTR区),抑制其上游基因的表达

鉴于miRNA的特点及luc的特性。 miRNA及其靶结合位点的验证可以通过双荧光实验来实现:包括miRNA与其靶点相关分析miRNA靶基因验证lncRNAcircRNA 吸附miRNA验证


 

检测原理:

   miR潜在结合构建到报告载体上F-Luciferase下游,将报告载体与 miRmimics共同转染到细胞内测定荧光素酶值,分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性


 

检测方法及载体工具:

   miR潜在结合位点上下游~500bphe/或突变位点)构建到荧光素酶报告载体上psiCHECK2F-Luciferase下游3UTR区,载体上持续性表达R-Luciferase元件作为内参, miRmimics(小片段双链miRNA / NC共同转染293T细胞共同转染到细胞内测定荧光素酶值,分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性


miRNA及靶点验证F-Luciferase报告载体

 

 

产品规格

Dual-Luciferase Reporter Assay Kit (100 rxns)

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Luciferase Reaction Buffer                                                  10 ml

Luciferase Reaction Substrate (Lyophilized)                                     1 vial

Luciferase Reaction Buffer II                                                 10 ml

Luciferase Reaction Substrate II125X                                      80μL

Lysis Buffer (5X)                                                           10 ml

 

 

 

实验步骤:

一、细胞转染

 转染48 h后收集样检测。

二、荧光检测

1.      将培养箱中的24孔板取出,放在室温,至细胞平衡到室温。

2.      加入细胞裂解液Lysis Buffer,充分裂解后12000rpm 4℃离心10min并转移至96孔板中。

3.      每孔加入F-Luc底物试剂,放入酶标仪中测定记录Firefly luciferase值。

4.      每个孔中加入Stop solution终止F-Luc反应并淬灭F-Luc荧光

5.      每孔加入R-Luc底物放入酶标仪中测定记录Renillaluc luciferase

6.      计算Firefly luciferase相对荧光值F-Luc/ R-Luc

 


Chinese, Simplified
 
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