QPCR检测

qPCR背景介绍

在实时荧光定量PCR中,对每一轮循环的荧光信号强度进行监测并记录,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。一般而言,扩增曲线可以分成三个阶段:基线期(Baseline phase),指数增长期(Log-linear phase)和平台期(Plateau phase)(图一)。在扩增早期即基线期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,所以根据最终的PCR产物量不能计算出初始模板量。只有在荧光信号指数扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,可在此阶段进行定量分析。

 

流程图

 

汉恒提供服务项目

汉恒生物科技(上海)有限公司提供从引物设计,细胞或者组织样品处理,qPCR检测以及完整的数据报告等服务。为您提供最优质的服务,为您的科研保驾护航。

客户提供:

1.细胞:细胞数106-107;组织:总量>100mg;DNA或RNA样品:总量>2 μg

2.靶基因信息:包括基因序列或GenBank 登录号等

3.背景资料:包括生物物种信息、基因功能、用途、特性、DNA/RNA 来源等

(备注:请在送样前,与技术确认具体送样情况。)

 

实例展示

(Hou Z ,Qin X ,Hu Y ,et al. 2019)

     在研究长期锻炼保护心脏的分子机制中,研究人员对运动大鼠(Exe-exo)和久坐大鼠(Sed-exo)的外泌体进行miRNA-seq和qPCR,来确定研究目标与心脏保护相关的miR-342 5p。

 

参考文献:

Hawkins, S. F. C, Guest, P. C. Multiplex Analyses Using Real-Time Quantitative PCR[J]. Methods in Molecular Biology,2016,1546:125-133.

Wong M L , Medrano J F . Real-time PCR for mRNA quantitation[J]. BioTechniques, 2005, 39(1):75-85

Hou Z , Qin X , Hu Y , et al. Longterm Exercise-Derived Exosomal miR-342-5p: A Novel Exerkine for Cardioprotection[J]. Circulation Research, 2019,124(9):1386-1400.

Chinese, Simplified
 
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