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化学修饰的热启动DNA聚合酶,在室温时酶活力被完全抑制,避免非特异性扩增。95oC加热数分钟后抑制失效,Taq酶恢复活力。
SYBR Green I游离状态下几乎无荧光,与双链DNA非特异性结合后产生很强的荧光。反应体系中SYBR Green I的荧光强度,与双链DNA的含量成正比,因此可用于目的基因的定量。
货号 | 产品名称 | 产品规格 |
---|---|---|
HB-START-1000 | HBStart Green qPCR Premix | 1mL |
HB-START(LR)-1000 | HBStart Green qPCR Premix (Low Rox) | 1mL |
HB-START(HR)-1000 | HBStart Green qPCR Premix (High Rox) | 1mL |
Component | Volume(10ul) | Volume(20ul) | Final Concentration |
---|---|---|---|
Template | XuL | XuL | |
Forward Primer (10 uM) | 0.2uL | 0.4uL | 0.2uM |
Reverse Primer (10 uM) | 0.2uL | 0.4uL | 0.2uM |
2×HBStart Green qPCR Premix | 5uL | 10uL | 1X |
Nuclease-free Water | (4.6-X)uL | (9.2-X)uL | |
Total Volume | 10uL | 20uL |
注:
I、DNA模板的添加量通常在100 ng以下,不同类型的模板目的基因拷贝数有所差异,必要时可进行梯度稀释,确定合适的模板添加量;
II、建议模板用量不超过总体系的10%。
2、PCR程序
高扩增效率选择三步法;高特异性选择两步法。
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