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mCherry-EGFP-RAMP4 | 内质网自噬 | 慢病毒、腺病毒、腺相关病毒 |
mCherry-RAMP4 | ||
ssmRFP1-EGFP-KDEL |
1)mCherry-EGFP-RAMP4和ssmRFP1-EGFP-KDEL病毒工具
在细胞质中,红色和绿色荧光蛋白同时表达,为黄色;若发生内质网自噬,在溶酶体中,由于其偏酸性的环境,绿色荧光蛋白淬灭,只剩红色荧光信号。可通过统计红色荧光斑点数来监测内质网自噬。
PMID:30143524(mCherry-EGFP-RAMP4工具)
PMID: 31006538(ssmRFP1-EGFP-KDEL工具)
此外,在溶酶体中,ssmRFP1-EGFP-KDEL工具中的mRFP1与EGFP间的linker会被剪切,也可通过Western Blot结果统计mRFP1/mRFP1-EGFP比值来指示内质网自噬。
PMID: 31006538(ssmRFP1-EGFP-KDEL工具)
2)mCherry-RAMP4病毒工具:
在细胞质中,融合蛋白mCherry-RAMP4表达;若发生内质网自噬,融合蛋白会被水解酶切割,产生游离的mCherry,结合Western Blot结果统计mCherry与mCherry-RAMP4条带强度的比值mCherry/mCherry-RAMP4来指示内质网自噬。
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