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悬浮细胞专用腺病毒
汉恒生物研发的悬浮细胞专用腺病毒针对悬浮细胞的细胞膜特性进行了腺病毒的改造,病毒感染体系也进行了相应的优化,极大改善对悬浮细胞的感染能力。对贴壁细胞的感染能力无影响,可以通用。 汉恒悬浮细胞专用腺病毒对Jurkat、K562等众多悬浮培养细胞系感染效率接近100%,对血液来源原代细胞,如CD4+ T细胞感染效率可达60%以上。
腺病毒有如下特点:
感染范围广
腺病毒可适用于普通细胞系的感染,也可用于悬浮细胞、原代细胞等。
感染效率高
腺病毒的滴度可高达1011PFU/ml,感染效率高,可感染悬浮细胞、原代细胞等。
载体容量大
腺病毒的载体容量较大,最高可达8kb。
悬浮细胞专用腺病毒感染注意事项:

1、悬浮细胞准备:腺病毒建稳转细胞系前,请确保目的细胞状态良好、无支原体污染。腺病毒感染的时候细胞汇合率为40%~60%间为宜。

2、感染细胞最佳MOI的测定:MOI(感染复数)是指每个细胞感染的病毒数。 

注:腺病毒对于不同种类不同来源的细胞,其最适MOI各有差别。对于悬浮细胞,腺病毒MOI一般以30, 100, 300, 1000, 2000的比例递增进行梯度摸索,相比于贴壁细胞,悬浮细胞的腺病毒MOI需求更高,MOI梯度摸索建议用96孔板进行以节省病毒和细胞。

3、MOI对应病毒体积的换算 

感染时细胞数(一般以传代计数细胞数×2计算)×MOI=病毒个数;则加入的病毒体积数=病毒个数/病毒滴度

悬浮细胞专用腺病毒感染实例:

悬浮细胞专用腺病毒感染悬浮细胞:


病毒: Ads-GFP,1×10¹º PFU/ml

感染细胞:Jurkat、K562、HL-60、L2110

感染方式:MOI=500

检测方法:感染72 h后荧光显微镜检测


悬浮细胞专用腺病毒Ads感染小鼠原代CD4+ T细胞:


细胞:小鼠原代CD4+ T细胞

刺激方式:CD3/CD28抗体和IL-2激活48h

病毒:Ads-GFP, 1×1010 PFU/ml

使用方式:MOI=500


悬浮细胞专用腺病毒Ads感染人原代CD4+ T细胞:


细胞:人原代CD4+ T细胞

刺激方式:CD3/CD28抗体和IL-2激活48h

病毒:Ads-GFP, 1×1010 PFU/ml

使用方式:MOI=100