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miRNA和靶基因相互作用

MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,一个miRNA可以靶向几个不同基因进行调节,同时几个miRNAs也可以调节同一个基因。MiRNA可以与编码基因mRNA的3’UTR结合也可以直接与circRNA或lncRNA结合来调控相关基因的表达。

汉恒生物所使用的荧光素酶报告基因载体psi-CHECK2采用了萤火虫/海肾双荧光素酶双报告基因系统,其中海肾荧光素酶作为检测报告基因,而萤火虫荧光素酶则作为内参报告基因。验证miRNA与mRNA/lncRNA/circRNA的互作,将要研究的靶点序列(序列可以是mRNA的3’UTR,也可以是lncRNA/circRNA序列)插入到报告载体中,作为萤火虫荧光素酶的3‘UTR,与miRNA的mimic共同转染细胞,如果荧光素酶表达量下降(荧光信号下降),提示序列包含miRNA的靶点。

在验证circRNA/lncRNA与miRNA的靶点产生竞争性结合时,可以在转染报告质粒和mimics的基础上转染认为有竞争结合位点的circRNA/lncRNA过表达质粒或者将具有竞争性结合位点的circRNA/lncRNA敲低,观察R-Luciferase活性的改变。当过表达circRNA/lncRNA时荧光素酶活性升高,或者敲低circRNA/lncRNA时荧光素酶活性降低则表明他们之间存在对miRNA的竞争性结合,反之则不存在竞争性结合。


pSI-check2 质粒图谱

实验原理:

    验证mir与其靶基因的相互作用最常用的方法便是双荧光素酶验证试验。

    荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称,其中最有代表性的是来自萤火虫 (Firefly) 体内和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase。

    这两种荧光素酶作用方式不同。一是底物和辅助因子不同,萤火虫荧光素酶需要荧光素、O2、ATP 和 Mg2+,而海肾荧光素酶仅需要腔肠素(coelenterazine)和 O2。二是发光颜色不同,萤火虫荧光素酶产生黄绿色光,发光波长为 560 nm;而海肾荧光素酶产生蓝光,发光波长为 465 nm。常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等研究。

microRNA与靶基因相互作用研究:

microRNA与靶基因结合验证:验证microRNA与靶基因(mRNA,lncRNA,circRNA)结合作用

ceRNA作用研究:验证不同把好基因对microRNA的竞争性结合作用

microRNA与靶基因结合验证服务流程:

其他服务(产品):

1、启动子报告质粒构建

2、miRNA靶基因报告质粒构建

3、单(双)荧光素酶检测试剂盒

客户发表文献节选:
Long non-coding RNA NORAD/miR-224-3p/MTDH axis contributes to CDDP resistance of esophageal squamous cell carcinoma by promoting nuclear accumulation of β-catenin
(杂志:Molecular Cancer,IF=27.401,河北医科大学)
Hypoxia-induced circWSB1 promotes breast cancer progression through destabilizing p53 by interacting with USP10
(杂志:Molecular Cancer,IF=27.401,重庆医科大学)
Small extracellular vesicles deliver osteolytic effectors and mediate cancer‐induced osteolysis in bone metastatic niche
(杂志:J Extracell Vesicles,IF=25.843,西南医院)
Nanoprobes‐Assisted Multichannel NIR‐II Fluorescence Imaging‐Guided Resection and Photothermal Ablation of Lymph Nodes
(杂志:Advanced Science,IF=16.806,浙江大学邵逸夫医院)
A novel inactivated whole-cell Pseudomonas aeruginosa vaccine that acts through the cGAS-STING pathway
(杂志:Signal Transduction and Targeted Therapy,IF=12.900,四川大学华西医院)