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自噬金牌研究工具
  自噬(Autophagy)是指细胞内非必需的或功能紊乱的组分通过溶酶体降解成氨基酸、脂质、糖等基础营养物质的过程。自噬既是细胞应对极端环境的一种特殊手段,也是调控细胞正常生命活动的重要机制,自噬异常往往也是引起细胞损伤和老化的重要因素。目前已知,自噬参与了肿瘤、衰老、炎症、免疫应答、心脑血 管疾病、氧化应激、神经退行性疾病、代谢、发育等许多重要的生物学过程。
汉恒产品特点:
权威性高
汉恒自噬双标腺病毒荣登CELL主刊;
现货全
多种自噬相关基因病毒及工具病毒现货;
种类多
提供慢病毒、腺病毒、腺相关病毒以及质粒
自噬LC3双标病毒产品参数:
产品编号产品名称产品规格
HB-AP210 000自噬双标腺病毒
1mL(1010PFU)
HB-LP210 0001自噬双标慢病毒1mL(108TU)
HB-AVP210 0001自噬双标腺相关病毒

1mL(1012v.g)

自噬简介:

自噬(Autophagy),是指溶酶体中的水解酶非特异地降解细胞质中蛋白质、细胞器等底物的过程,它同时还受复杂信号精细调控,研究比较清楚的有PI3K-I和PI3K-III、mTOR等。 自噬过程一般分为三个阶段: 自噬起始阶段、自噬小体形成阶段、自噬溶酶体阶段。它参与着肿瘤、衰老、炎症、免疫应答、心脑血管疾病、氧化应激、神经退行性疾病、代谢、发育等重要生物学过程。 自噬研究的切入角度: 通常除了研究自噬本身,更多的是把自噬作为一个机制来研究,如自噬如何参与肿瘤的发生发展、自噬如何参与肿瘤的耐药性、自噬如何参与炎症反应、自噬如何参与氧化应激、甚至自噬如何参与自闭症、阿尔兹海默症的发生与治疗等


调控自噬的主要信号通路和相关基因


衡量自噬的黄金标准:

1、LC3剪切的变化

2、电镜直接观察到自噬囊泡

3、荧光蛋白标记的LC3检测自噬流



衡量自噬的三个“黄金标准”,分别是LC3的翻译后加工及脂化修饰(图A)、利用电镜直接观察自噬小体和自噬溶酶体的多少、荧光蛋白标记的LC3监测自噬流(图B)。

汉恒生物自噬领域的研究工具:

主流自噬示踪工具一:mRFP-GFP-LC3 自噬双标腺病毒(现为mCherry-eGFP-LC3)


双荧光指示体系原理


mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。

我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。

如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。


红色且没有绿色的斑点代表自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点代表自噬小体(RFP+GFP),(由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光)

Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy. 

汉恒客户2017年发表于CELL,IF>30.


主流定位示踪工具二:p62

U2OS用GFP-p62和LC3-RFP同时标记。然后用60 μM 氯喹处理16hr。可以观察到二者有着明显的共定位。(当诱导自噬时,GFP-p62融合蛋白被招募到自噬小体上,呈现绿色小点。如果此时加入氯喹抑制自噬流, 那么GFP-p62就会累积在自噬小体和自噬溶酶体上)



选择性自噬定位工具: Keima探针


Keima探针研究核糖体选择性自噬的基本原理

客户发表文献节选:
Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy
(杂志:CELL,IF=41.582,上海交通大学附属仁济医院)
atg7-Based Autophagy Activation Reverses Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity
(杂志:Circulation Research,IF=17.367,北京中医药大学)
PIWIL2 interacting with IKK to regulate autophagy and apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma
(杂志:Cell death and differentiation,IF=15.828,四川大学华西医院)
USP11 regulates autophagy-dependent ferroptosis after spinal cord ischemia-reperfusion injury by deubiquitinating Beclin 1
(杂志:Cell Death & Differentiation,IF=15.828,南京医科大学第一附属医院)
Nanoprodrug ratiometrically integrating autophagy inhibitor and genotoxic agent for treatment of triple-negative breast cancer
(杂志:Biomaterials,IF=12.479,浙江大学医学院第二附属医院)