明星产品
干货推荐
关注我们
扫码关注我们
了解更多信息
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
|---|---|---|
| HBScript cDNA 反转录试剂盒 | HB-Script-100 | 100T |
| 组分 | 规格 |
|---|---|
| HBScript cDNA Synthesis Master Mix (5×) | 200 μL |
| dsDNase | 50 μL |
| 10× dsDNase Buffer | 100 μL |
| Nuclease-Free Water | 1mL |
-20℃保存，冰袋运输
1、针对基因组DNA含量低的RNA样品（推荐方案）
①于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
|---|---|
| 模板RNA | 50 ng～1 μg |
| HBScript cDNA Synthesis Master Mix | 2 μl |
| dsDNase | 0.5 μl |
| Nuclease-Free Water | To 10 μl |
注：推荐使用试剂盒提取的高质量RNA作为模板。
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染；
④55℃温育15 min；
⑤反应结束后，85℃温育5min以终止反应，PCR仪可以设置4℃，以防未及时放置在冰上；
⑥迅速将获得的cDNA置于冰上，用于后续实验；或立即保存于-20℃。
2、针对基因组DNA含量高的RNA样品
（1）基因组DNA污染去除
①于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量 |
|---|---|
| 模板RNA | 50 ng～1 μg |
| dsDNase | 0.5 μl |
| 10×dsDNase Buffer | 0.5 μl |
| Nuclease-Free Water | To 5 μl |
注：推荐采用试剂盒提取的RNA作为模板。
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③37℃温育2 min，以去除基因组DNA污染；
注：若RNA中基因组DNA污染严重，可适当延长37℃温育时间至5 min。
④65℃温育2 min，使dsDNase失活，冰上放置。
（2）第一链cDNA合成
①于冰上配制如下反应体系：
| 试剂 | 使用量（实验组） |
|---|---|
| "实验(1)"反应产物 | 5 μl |
| All-in-One First-Strand Synthesis Master Mix | 2 μl |
| Nuclease-Free Water | To 10 μl |
②轻柔吸打混匀，瞬离；
③50℃温育15 min；
注：若目标RNA不含Poly(A)结构，可预先25℃温育10 min。
④反应结束后，85℃温育5 min，以终止反应，PCR仪可以设置4℃，以防未及时放置在冰上；
⑤将获得的cDNA溶液置于冰上，用于后续实验。
注：cDNA可直接用于qPCR，或将溶液置于-20℃储存，建议不超过1周；置于-80℃可长期储存；应避免反复冻融。
联系我们
返回顶部
8632
