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荧光素酶检测试剂盒

产品列表

货号产品名称规格适用
HB-DLR-100双荧光素酶检测试剂盒
(Dual-Luciferase Reporter Assay Kit)
100 rxns双报告系统:F-Luc 与 R-Luc 顺序检测
HB-SLR-100荧光素酶(Firefly)检测试剂盒100 rxns单报告系统:仅检测 F-Luc 活性

检测原理

单报告检测以荧光素为底物直接读取 F-Luc 活性;双报告则在同一孔中先读 F-Luc、再加入 Reagent II 淬灭 F-Luc 并激发 R-Luc,依次完成两种检测,互不干扰,再以 F/R 比值归一化分析。

双荧光素酶检测原理:裂解 — 检测 — 读值 单报告(HB-SLR-100)一步读值;双报告(HB-DLR-100)先读 F-Luc,再加 Reagent II 淬灭 F-Luc 并激发 R-Luc ① 细胞裂解 1X Lysis Buffer,96 孔板常规操作 ② + Reaction Reagent → 读 F-Luc 萤火虫荧光素酶,黄绿色光 · 560 nm ③ + Reagent II 淬灭 F-Luc,激发 R-Luc(腔肠素) ④ 读 R-Luc → 计算 F/R 海肾荧光素酶,蓝光 · 465 nm,比值归一化 F-Luc 黄绿光 · 560 nm 检测报告基因 R-Luc 蓝光 · 465 nm 内参报告基因 单报告试剂盒(HB-SLR-100) 仅完成 ② 读 F-Luc 即结束,适用于只需检测单一 报告基因活性的场景。
图1:双荧光素酶检测原理。双报告在同一样本中顺序检测 F-Luc 与 R-Luc,以 F/R 比值校正转染效率与细胞数差异。

检测原理要点

  • 单报告检测(HB-SLR-100):以荧光素(luciferin)为底物,催化氧化发光检测 F-Luc 报告基因活性,灵敏度达 10⁻¹⁸ mol 级,信号稳定。
  • 双报告顺序检测(HB-DLR-100):先以 Reagent 检测 F-Luc;随后直接加入 Reagent II,淬灭 F-Luc 信号的同时激发 R-Luc(底物为腔肠素 coelenterazine)信号,同孔依次完成两种检测,互不干扰。
  • 归一化分析:以 F/R 比值校正转染效率与细胞数差异,使结果更具可比性。

试剂盒与汉恒报告基因检测服务、报告质粒体系配套使用,一步完成"裂解 — 检测 — 读值",既保留单报告的高灵敏,又通过 R-Luc 内参消除孔间差异。

同孔双检:同一样本中顺序检测两种荧光素酶,无需分开检测;Reagent II 在淬灭 F-Luc 的同时激发 R-Luc,两种信号互不干扰。

两种检测模式

单报告检测(HB-SLR-100)

检测对象
仅 F-Luc(萤火虫荧光素酶)
底物
荧光素(luciferin)
发光特征
黄绿色光 · 560 nm
适用系统
单报告系统

双报告顺序检测(HB-DLR-100)

检测对象
F-Luc + R-Luc(海肾荧光素酶)
底物
荧光素 + 腔肠素(coelenterazine)
发光特征
黄绿光 560 nm + 蓝光 465 nm
适用系统
双报告系统(F/R 归一化)

试剂盒组成与保存条件

HB-SLR-100(Firefly,100 rxns)

组分规格
Luciferase Reaction Buffer10 mL
Luciferase Reaction Substrate(冻干粉)1 vial
Lysis Buffer(5X)10 mL

HB-DLR-100(Dual,100 rxns)

组分规格
Luciferase Reaction Buffer10 mL
Luciferase Reaction Substrate(冻干粉)1 vial
Luciferase Reaction Buffer II10 mL
Luciferase Reaction Substrate II(125X)80 μL
Lysis Buffer(5X)10 mL

保存条件

试剂盒整体 -20℃ 保存;Lysis Buffer -20℃ 可保存一年;

反应试剂加入底物后请分装、避光保存:-70℃ 可保存一年,-20℃ 可保存一个月,避免反复冻融;

试剂使用前平衡至室温。

使用方法(简要)

01

细胞裂解

细胞样品以 1X Lysis Buffer 裂解(96 孔板常规操作)。

02

配制反应工作液

配制 Luciferase 反应工作液(避光)。

03

读取 F-Luc

取裂解上清加入读板,加入工作液后立即读取 F-Luc 发光值。

04

读取 R-Luc(双报告)

再加入 Reagent II,淬灭 F-Luc 同时激发 R-Luc,读取 R-Luc 发光值。

05

归一化分析

以 F/R 比值进行归一化分析。

注:详细操作请以随货说明书为准;不同发光仪请按仪器灵敏度设置积分时间。

产品图示

以下为两款试剂盒的产品图展示位,待补充真实产品图(建议白底实物图 / 试剂盒包装图)。

产品图待插入
(双荧光素酶检测试剂盒 HB-DLR-100)
双荧光素酶检测试剂盒 HB-DLR-100(100 rxns)
产品图待插入
(荧光素酶 Firefly 检测试剂盒 HB-SLR-100)
荧光素酶(Firefly)检测试剂盒 HB-SLR-100(100 rxns)

应用场景

报告基因检测

Reporter Assay

双荧光素酶报告基因检测:启动子活性、miRNA 靶基因、ceRNA 验证。

信号通路激活检测

Pathway

配合汉恒 pHBLuc 系列通路报告质粒,检测信号通路激活状态(见质粒 / 载体页)。

药物筛选与调节研究

Screening

药物筛选与细胞因子调节研究,高通量读值适配 96 / 384 孔板。

RNA 干扰 / 过表达下游读值

RNAi / OE

RNA 干扰、过表达系统的下游读值,定量评估调控效应。

常见问题
细胞裂解后的样品能保存多久?
裂解产物可 -80℃ 保存约半年、-20℃ 保存一个月;建议现裂现测获得最佳信号。
底物需要严格避光吗?
操作过程不需严格避光,保存时需避光;更关键的是低温(海肾底物腔肠素建议 -70℃ 或更低)。
报告载体与内参载体的共转比例?
建议做预实验梯度:如 1:10、1:20、1:50、1:100,选取内参信号处于仪器线性范围的比例。
F-Luc 和 R-Luc 是在同一个孔里检测吗?
是。Reagent II 会淬灭 F-Luc 信号后再激发 R-Luc,两种信号互不干扰,无需分开检测。
反复冻融有影响吗?
工作液分装保存可避免反复冻融;底物反复冻融 5 次内信号基本不受影响,但仍建议按次分装。
与进口品牌相比性能如何?
汉恒 HB-DLR-100 发光强度与淬灭效果与主流进口品牌相当,国产自研、现货供应、价格更具优势。【建议补实测对比数据图】
提供试用装吗?
【建议填写:试用装政策】
和检测服务怎么选?
自备仪器与人力可购试剂盒自测;希望一站式交付数据可委托汉恒双荧光素酶检测服务(见服务页)。
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汉恒生物每年为1w+客户提供优质服务,项目经验10W+,期待与您的合作
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