无缝克隆试剂盒

汉恒生物研发的HB-infusion^TM无缝克隆试剂盒操作极其简单，仅需在载体的克隆位点进行线性化，并在插入片段 PCR 引物的 5’端引入与载体克隆位点两端完全一致的 15~25 bp 同源序列。将上述线性化的克隆载体和带有同源序列的 PCR 片段按合适比例混合，并加入 HB-infusion^TM Master mix，通过反应体系中 DNA外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的在 50℃反应 20 min 即可快速完成定向克隆，阳性率几近 100%。

无缝克隆特点：

操作简单且快速

可以不需要任何限制性内切酶、连接酶，也不需要磷酸化、末端补平等操作；体系反应时间，仅需20min

应用广泛

可同时连接多个DNA片段，最多可达10个

精确高效

不附加任何多余序列，精确定向连接，阳性率高

无缝克隆原理：

在基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增阶段，与常规PCR法是相同的。唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。

HB-infusion^TM无缝克隆原理示意图

无缝克隆与传统克隆对比：

无缝克隆	传统克隆
只需要一次反应即可完成定向克隆，省略酶切、酶连等过程	PCR引物设计需引入载体上的酶切位点， PCR产物再经过酶切、胶回收、连接后定向克隆到目的载体上；或进行TA载体连接
对酶切位点无要求，可以把目的片段插入到任意载体的任意位点	需要查找合适的酶切位点，购买各种内切酶
连接片段之间不会引入任何其他序列	阳性率低
可以同时克隆多个片段	多个片段，通常只能分多次拼接

HB-infusion^TM产品包装：

货号	产品组成	使用次数	体积
HB-infusion-20T	2 x HB-infusion^TM Master mix	20 tests	200uL
	Positive linearized pUC vector （250 ng）	5 tsets	25uL
	Positive control insert (500 ng)	5 tsets	25uL
	储存条件	-20℃