Mol Cancer丨双重身份的抑癌分子：circZFAND6抑制胃癌转移并逆转耐药

胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤，尽管目前化疗和免疫治疗已取得显著进展，但胃癌患者，尤其是伴有腹膜转移的胃癌患者的预后仍然不佳。越来越多的证据表明，环状RNA（circRNA）在癌症的发生发展中发挥关键作用，其机制涉及基因转录调控、作为竞争性内源RNA（ceRNA）吸附microRNA、与RNA结合蛋白相互作用以及编码肽段等多种方式。然而，circRNA在胃癌腹膜转移（GCPD）中的作用仍不清楚。

2025年12月11日，中山大学附属第六医院陈实教授团队在Molecular Cancer（IF=33.9）杂志上发表了题为“CircZFAND6 suppresses gastric cancer metastasis and reduces resistance to TKI therapy”的研究论文。该研究首次揭示circZFAND6在GCPD中表达显著下调。机制上，circZFAND6一方面通过竞争性结合miR-6815-3p上调APC表达，进而抑制Wnt/β-catenin信号通路；另一方面circZFAND6通过滚动翻译产生circZFAND6-aa肽段，竞争结合ERBB3以阻断PI3K/AKT通路，进而逆转TKI（酪氨酸激酶抑制剂，靶向药）耐药。该研究明确了circZFAND6在GCPD中的双重调控机制，提示其可作为胃癌预后标志物与潜在治疗靶点。汉恒生物有幸为本研究提供circZFAND6野生型和突变型报告质粒，用于验证其与miR-6815-3p的靶向结合关系。

下面，我们一起来看看具体的研究内容。

研究成果

circZFAND6在胃癌中显著下调

为筛选参与胃癌腹膜转移的关键circRNA，本研究对四例胃癌患者的组织样本（包括腹膜转移灶、原发灶和正常组织）进行circRNA测序。通过分析在转移灶与正常组织间差异表达的circRNA，获得三个候选分子：circZFAND6、circRBM33和circMAN1A2。进一步联合三个公共GEO数据集进行验证，发现仅circZFAND6在胃癌组织中呈现一致的显著下调，故将其作为研究对象。CircZFAND6来源于ZFAND6基因2-4号外显子的反向剪接，经反向引物扩增和Sanger测序确认了其头尾环化结构；该circRNA仅在cDNA中可扩增，并对RNase消化具有较高稳定性，且其主要定位于细胞质。

图1. GCPD中circRNA的鉴定及circZFAND6的表征

circZFAND6的低表达与胃癌患者的不良预后相关

为验证circZFAND6在胃癌中的表达特征，作者分析了90对胃癌组织样本。结果显示肿瘤组织中circZFAND6普遍低于癌旁正常组织，其中71.1%患者表达下调。在胃癌细胞系中，尤其是HGC27和AGS细胞中circZFAND6的表达也显著低于正常胃上皮细胞。临床关联分析表明，circZFAND6低表达与更高T分期及印戒细胞癌/黏液腺癌等恶性病理类型相关。Kaplan-Meier生存分析显示circZFAND6低表达患者总生存期更短。这些结果提示circZFAND6下调可作为胃癌预后不良的潜在标志物。

图2. 胃癌中circZFAND6表达下调并与胃癌患者预后相关

circZFAND6抑制胃癌的增殖与转移

为探究circZFAND6在胃癌进展中的功能，作者在HGC27和AGS细胞中过表达circZFAND6并开展一系列功能实验显示。结果显示，过表达circZFAND6可显著抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。进一步通过裸鼠腹膜转移模型进行体内验证发现，过表达circZFAND6能显著减少腹腔转移结节的数量和大小。上述结果表明，circZFAND6在体内外均能抑制胃癌的增殖与转移。

图3. circZFAND6促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

CircZFAND6作为miR-6815-3p的海绵抑制胃癌恶性进展

鉴于circZFAND6主要定位于细胞质，作者推测其可能通过吸附miRNA发挥功能。通过多数据库交叉预测及AGO2 RIP-qPCR实验验证，发现circZFAND6可直接结合miR-6815 -3p。荧光素酶报告基因实验进一步证实二者通过特异性序列位点相互作用，且FISH实验显示二者在细胞质内存在共定位。临床分析显示，miR-6815-3p高表达与胃癌患者不良预后相关。

图4. circZFAND6作为miR-6815-3p的海绵

功能回复实验表明，过表达circZFAND6可显著逆转miR-6815-3p模拟物（mimic）对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。此外，circZFAND6还能拮抗miR-6815-3p对上皮-间质转化(EMT)关键标志物（ZEB1、MMP9、Vimentin等）的上调作用。上述结果证明，circZFAND6通过海绵吸附miR-6815-3p抑制胃癌的恶性进展。

图5. miR-6815-3p mimic促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭，且可被circZFAND6逆转

CircZFAND6通过miR-6815-3p/APC轴抑制Wnt/β-catenin信号通路

为阐明circZFAND6的作用机制，作者进行了转录组测序及通路富集分析，提示其过表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路。结合多数据库预测与测序数据筛选，发现抑癌基因APC是miR-6815-3p的潜在靶标，且在circZFAND6过表达后显著上调。实验证实，circZFAND6可拮抗miR-6815-3p对APC mRNA和蛋白表达的抑制作用。荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-6815-3p可直接靶向APC。生存分析显示APC高表达与胃癌患者良好预后相关。机制上，circZFAND6通过吸附miR-6815-3p解除其对APC的抑制，从而下调β-catenin及其下游靶基因c-Myc、cyclin D1、MMP2的表达，最终抑制Wnt/β-catenin信号通路活性。以上结果揭示circZFAND6通过miR-6815-3p/APC轴失活Wnt/β-catenin通路，抑制胃癌进展。

图6. circZFAND6/miR-6815-3p/APC轴通过Wnt信号通路抑制胃癌进展

CircZFAND6增强胃癌对吉非替尼治疗的敏感性

鉴于KEGG分析提示circZFAND6可能与TKI耐药相关，作者进一步探究了其对吉非替尼疗效的影响。体外实验发现，过表达circZFAND6可显著降低HGC27和AGS细胞对吉非替尼的IC50值，并增强吉非替尼对细胞增殖的抑制。在裸鼠移植瘤模型中，circZFAND6过表达联合吉非替尼治疗显示出最强的肿瘤生长抑制效果，其作用显著优于任一单一治疗。机制上，联合治疗组中EMT标志物（MMP9、Vimentin、Snail）表达降低而上皮标志物E-cadherin表达增加，Wnt/β-catenin通路关键蛋白β-catenin、Cyclin D1的表达也受到显著抑制。这些发现表明circZFAND6过表达抑制EMT和Wnt/β-catenin信号通路，从而增强胃癌对吉非替尼治疗的敏感性。

图7. circZFAND6提高吉非替尼在体外和体内的疗效

circZFAND6通过滚动翻译产生circZFAND6-aa并直接结合ERBB3，逆转胃癌吉非替尼耐药

为进一步探究circZFAND6增敏吉非替尼的机制，作者发现其作用不依赖于对miR-6815-3p的海绵吸附。生信分析提示circZFAND6具有编码潜能，实验证实其可通过滚动翻译机制编码一段127个氨基酸的多肽（circZFAND6-aa）。该编码功能是其增敏吉非替尼所必需的，ATG位点突变会使其丧失该功能。机制上，circZFAND6过表达能抑制PI3K/AKT通路活性并降低EGFR/AKT磷酸化。进一步研究表明，circZFAND6-aa可与ERBB3直接结合，从而可能干扰EGFR-ERBB3相互作用，抑制下游PI3K/AKT通路活化，最终逆转吉非替尼耐药。

图8. circZFAND6-aa与ERBB3相互作用，通过降低PI3K/AKT通路的激活来逆转胃癌中的吉非替尼耐药性

总结

综上所述，本研究鉴定出了一个在胃癌及其腹膜转移中下调的新型circRNA—— circZFAND6。研究结果表明，circZFAND6可能在胃癌（尤其是GCPD）进展中起重要作用。其表达水平与患者预后正相关，提示其可能作为胃癌新型特异性独立生物标志物。机制上，一方面CircZFAND6通过miR-6815-3p/APC轴抑制胃癌进展，另一方面通过其编码的新型多肽circZFAND6-aa逆转胃癌TKI耐药。这些发现揭示了circZFAND6在胃癌中的潜在治疗价值，为GCPD及TKI耐药提供了新的干预策略。

图9. circZFAND6抑制GCPD并增加吉非替尼疗效的机制示意图